实验操作流程：

（培养人脐静脉内皮细胞为例）

1、新生儿脐带：在无菌条件下，于健康产妇分娩后立即取新生胎儿脐带。长度>20 cm，两端扎紧投入到 4℃脐带保存液中，1h内送细胞培养室。

2、剪去脐带两端和脐带上有夹痕及血肿部分，尽量挤干净脐带内血液。

3、用生理盐水冲洗脐带表面至无血色。

4、用输血器内接有穿刺器的软管，找到脐静脉，将软管针头一端插入脐静脉，用止水夹固定，另一端接 20 m1注射器，吸取PBS反复冲洗脐静脉直至无血色液体流出为止；将脐带另一端用止血钳夹闭，向脐静脉中灌入0．1％ I型胶原酶溶液，使之充盈，夹闭软管。

5、37℃水浴中孵育20 min，其间轻轻挤压并旋转脐带，以使酶溶液充分接触血管内壁。

6、将细胞一酶溶液收集于预先装有温培养液小三角瓶中。用2倍于消化液的温PBS冲洗脐静脉，一并收集于小三角瓶中，将细胞悬液装入10 ml离心管，1000 r／min离心10 min，弃上清，吹打悬浮，再次离心10 min，重悬细胞并接种于铺有明胶的25 cm2培养瓶中，置于37℃ 5％ C02饱和湿度培养箱中培养，24h后更换培养液，以后每隔2d换液1次。

7、脐静脉内皮细胞的传代培养：当原代细胞融合80％以上后，加入 0．05％ 胰蛋白酶一0．02％EDTA 溶液消化，倒置显微镜下观察，当细胞皱缩变圆、彼此分离时弃消化液，加入细胞培养液终止消化，收集细胞悬液。1 000 r／min离心10 min，弃上清，制成单细胞悬液。此时可用0．5％台盼蓝染色，计算活细胞百分率，并以血细胞计数板计数。调整细胞浓度为1×10 个／ml，接种于培养瓶或培养板中继续培养。待细胞长满，彼此融合成片时依上述方法继续传代培养。

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1、细胞

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